WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 16 |

«Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Чувашский государственный педагогический университет им. И. Я. Яковлева ЦИТОЛОГИЯ Методические ...»

-- [ Страница 1 ] --

Министерство образования и науки Российской Федерации

Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Чувашский государственный педагогический

университет им. И. Я. Яковлева»

ЦИТОЛОГИЯ

Методические рекомендации

к лабораторно-практическим занятиям

ЧЕБОКСАРЫ

2010 2 УДК 576.3 ББК 28.05 Ц 747 Цитология : методические рекомендации к лабораторно-практическим занятиям / сост. И. Ю. Арестова, В. В. Алексеев. – Чебоксары : Чуваш. гос. пед.

ун-т, 2010. – 110 с.

Печатается по решению ученого совета ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И. Я. Яковлева»

В учебном пособии содержатся описания основных тем лабораторных и практических занятий по цитологии. Иллюстрации в виде схем, таблиц и рисунков, облегчающих работу с микропрепаратами и электронными микрофотографиями во время аудиторных и самостоятельных занятий.

Предназначается для преподавателей и студентов педагогических вузов очного и заочного отделений естественно-научных специальностей.

Рецензенты:

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И. Н. Ульянова» И. И. Малышев;

кандидат биологических наук, заведующая кафедрой биоэкологии и географии ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И. Я. Яковлева» М. Ю. Куприянова.

© Арестова И. Ю., Алексеев В. В., составление, © ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет им. И. Я. Яковлева»,

СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ И ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ

ПРЕПАРАТОВ

Тема Занятие 1. Основные методы изучения микрообъектов Главными этапами цитологического и гистологического анализа являются выбор объекта исследования, подготовка его для изучения в микроскопе, применение методов микроскопирования, качественный и количественный анализ изображений. Объектами исследования служат живые и фиксированные клетки и ткани, их изображения, полученные в световых и электронных микроскопах или на телевизионном экране дисплея.

Микроскопирование – основной метод изучения микрообъектов, используемый в биологии более 300 лет. С момента создания и применения первых микроскопов они постоянно совершенствовались. Современные микроскопы представляют собой разнообразные сложные оптические системы, обладающие высокой разрешающей способностью.

Рис. 1. Оптическая схема светового микроскопа. Свет, излучаемый источником света (1) собирается линзами конденсора (2) и пропускается через изучаемый препарат (3), который располагается на предметном столике (4). Далее свет направляется в линзы объектива (5), в фокальной плоскости которого формируется изображение. Преломляясь в призме (6), лучи через тубус (7) проецируются в линзы окуляра (8), который увеличивает сформированное изображение и направляет его в глаз.

Световая микроскопия – для изучения гистологических микрообъектов применяют обычные световые микроскопы и их разновидности, в которых используются источники света с различными длинами волн (ультрафиолетовая микроскопия, флуоресцентная (люминесцентная) микроскопия, фазовоконтрастная микроскопия, микроскопия в темном поле, интерференционная микроскопия, поляризационная микроскопия). Схема оптической системы светового микроскопа представлена на рисунке 1.

Электронная микроскопия – в электронном микроскопе используется поток электронов с более короткими, чем в световом микроскопе, длинами волн (рис. 2).

А Б Рис. 2. А – схема устройства сканирующего электронного микроскопа.

Пучок электронов, излучаемых электронной пушкой (1), фокусируется электромагнитными линзами конденсора (2) и объектива (3). Он сканирует поверхность изучаемого объекта (4) благодаря его отклонению дефлектором (5), который получает сигнал от генератора сканирования (6). Вторичные электроны (7), излучаемые поверхностью изучаемого объекта, воспринимаются детектором (8) и фокусируются на экране (9).

Б – схема устройства трансмиссионного электронного микроскопа. Пучок электронов, излучаемых электронной пушкой (1), включающей катод (2) и анод (3), фокусируется электромагнитными линзами конденсора (4), объектива (5) и проектора (6). После прохождения через изучаемый (7) пучок электронов направляется на флюоресцирующий экран (8), создавая изображение объекта, которое регистрируется на фотопластинке или фотопленке (9).

Основным объектом исследования являются гистологические препараты, приготовленные из фиксированных или живых структур. Препарат может представлять собой мазок (например, мазок крови, костного мозга, слюны, цереброспинальной жидкости и др.), отпечаток (например, селезенки, тимуса, печени), пленку из ткани (например, соединительной или брюшины, плевры, мягкой мозговой оболочки), тонкий срез. Наиболее часто для изучения используется срез ткани или органа.

Процесс изготовления гистологического препарата для световой и электронной микроскопии включает следующие основные этапы: взятие материала и его фиксация; уплотнение материала; приготовление срезов; окрашивание или контрастирование срезов. Для световой микроскопии необходим еще один этап – заключение срезов в бальзам или другие прозрачные среды.



Фиксация обеспечивает предотвращение процессов разложения, что способствует сохранению целостности структур. Это достигается тем, что взятый из органа маленький образец либо погружают в фиксатор (спирт, формалин, растворы солей тяжелых металлов, осмиевая кислота, специальные фиксирующие смеси), либо подвергают термической обработке. Под действием фиксатора в тканях и органах происходят сложные физико-химические изменения.

Наиболее существенным из них является процесс необратимой коагуляции белков, вследствие которого жизнедеятельность прекращается. Фиксация приводит к уплотнению и уменьшению объема кусочков, а также к улучшению последующей окраски клеток и тканей.

Уплотнение кусочков, необходимое для приготовления срезов, производится путем пропитывания предварительно обезвоженного материала парафином, целлоидином, органическими смолами. Более быстрое уплотнение достигается применением метода замораживания кусочков, например в жидкой углекислоте.

Приготовление срезов производится на специальных приборах – микротомах (для световой микроскопии, рис. 3) и ультрамикротомах (для электронной микроскопии).

Окрашивание срезов (в световой микроскопии) или напыление их солями металлов (в электронной микроскопии) применяют для увеличения контрастности изображения отдельных структур при рассматривании их в микроскопе.

Методы окраски гистологических структур очень разнообразны и выбираются в зависимости от задач исследования. Гистологические красители подразделяют на кислые, основные и нейтральные. В качестве примера можно привести наиболее известный основной краситель азур II, который окрашивает ядра в фиолетовый цвет, и кислый краситель – эозин, окрашивающий цитоплазму в розово-оранжевый цвет.

Избирательное сродство структур к определенным красителям обусловлено их химическим составом и физическими свойствами. Структуры, хорошо окрашивающиеся кислыми красителями (пикриновая кислота, эритрозин, конгорот, оранж, лихтгрюн и т. д.), называются оксифильными (ацидофильными, эозинофильными), а окрашивающиеся основными (гематоксилин, метиловый синий, азур, тионин, толлуидиновый синий и т. д.) – базофильными.

Структуры, воспринимающие как кислые, так и основные красители, являются нейтрофильными (гетерофильными).

Рис. 3. Приготовление постоянного гистологического препарата из объекта, залитого в парафин. Фиксированный и залитый в парафин кусочек биологического объекта (2) режут при помощи специальных стальных ножей (1) на специальном приборе – микротоме. При этом получается серия срезов (3), заданной толщины. Срезы далее размещаются на предметном стекле (4), подвергаются депарафинированию и окрашиванию. Далее обезвоживаются, просветляются, заключаются в прозрачную консервирующую среду (6) – бальзам или синтетическую смолу – и закрывают сверху покровным стеклом (5). В результате получают постоянный гистологический препарат (7).

Импрегнация – метод выявления структур клеток и тканей, основанный на различной их способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металлов (серебро, свинец, осмий, золото).

Окрашенные препараты обычно обезвоживают в спиртах возрастающей крепости и просветляют в ксилоле, бензоле, толуоле или некоторых маслах.

Для длительного сохранения обезвоженный гистологический срез заключают между предметным и покровным стеклами в канадский бальзам или другие вещества. Готовый гистологический препарат может быть использован для изучения под микроскопом в течение многих лет.

Для электронной микроскопии срезы, полученные на ультрамикротоме, помещают на специальные сетки, контрастируют солями марганца, кобальта и др., после чего просматривают в микроскопе и фотографируют. Полученные микрофотографии служат объектом изучения наряду с гистологическими препаратами.

В качестве примера рассмотрим последовательность операций для получения парафиновых срезов и их краски гематоксилин-эозином.

Подготовка гистологического материала и приготовление I. Фиксация небольших кусочков (0,5-1 см3) органов в 10% формалине – часа.

II. Промывание кусочков в воде – 24 часа.

III. Заливка в парафин:

1) обезвоживание кусочков проводкой по спиртам возрастающей крепости – 60, 700, 900, 1000, 1000 (в зависимости от характера материала от нескольких часов до 1 суток в каждом);

2) выдерживание в смеси равных частей 1000 спирта и ксилола – 1,5-3 ч;

3) выдерживание в первом чистом ксилоле – 1,5-3 ч;

4) выдерживание во втором чистом ксилоле – 1,5-3 ч;

5) выдерживание в насыщенном растворе парафина в ксилоле – 2 ч (в термостате при 37 0С);

6) выдерживание в первом чистом парафине – 1,5-2 ч (в термостате при 54С);

7) выдерживание во втором чистом парафине – 1,5-2 ч (в термостате при 54-56 0С);

8) выдерживание в третьем чистом парафине – 1-1,5 ч (в термостате при 54-56 0С);

9) заливка материала парафином, содержащим 2-5% пчелиного воска в бумажные или металлические формочки;

10) охлаждение в воде;

11) наклеивание на деревянные кубики и хранение в проветриваемом месте.

IV. Получение срезов:

1) нарезание на микротоме срезов толщиной 4-6 мкм;

2) помещение срезов на предметные стекла;

3) высушивание предметных стекол со срезами в термостате при 37 0С.

Окрашивание парафиновых срезов гематоксилин-эозином I. Депарафинирование:

1) удаление парафина из срезов в трех порциях ксилола – по 3-5 мин в каждом;

2) удаление из срезов ксилола с помощью 1000 спирта – 2-3 мин;

3) удаление из срезов спирта путем проведения по спиртам снижающихся крепостей – 960 и 700 по 2-3 мин в каждом и затем помещения в дистиллированную воду на 1-2 мин.

II. Окрашивание срезов:

1) помещение среза в водный раствор гематоксилина – 2-3 мин;

2) помещение среза в водопроводную воду – 5-10 мин;

3) помещение среза в дистиллированную воду – 2-5 мин;

4) помещение среза в водный раствор эозина – 0,5-1 мин;

5) помещение среза в дистиллированную воду – 0,5-1 мин.



Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 16 |

Похожие работы:

«ПРИОРИТЕТНЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРОЕКТ ОБРАЗОВАНИЕ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ И.И.ВАСЕНЕВ Е.Н. ПАКИНА СОВРЕМЕННЫЕ ДОСТИЖЕНИЯ В ОПТИМИЗАЦИИ АГРОЛАНДШАФТОВ И ОРГАНИЗАЦИИ УСТОЙЧИВЫХ АГРОЭКОСИСТЕМ Учебное пособие Москва 2008 Рецензент: профессор, доктор биологических наук Макаров О.А. Инновационная образовательная программа Российского университета дружбы народов Создание комплекса инновационных образовательных программ и формирование инновационной образовательной среды, позволяющих эффективно...»

«Электронная версия учебного пособия Природа и экология Красноярского края, 5 класс. Перед началом работы с компакт-диском (CD) внимательно ознакомьтесь с данными рекомендациями. Предлагаемый учебно – методический комплект на CD сформирован следующим образом: I. Методические рекомендации. Файл metodichka.doc, в папке metodа – электронная версия данного методического пособия. II. Учебное пособие. Файл nrk-5klass-zay.pdf из папки demo-pdf – книжный вариант учебного пособия Природа и экология...»

«Программа вступительных испытаний по биологии Организационно-методические указания по проведению экзамена. Экзамен проводится в письменной форме в виде теста и направлен на проверку знаний абитуриентов по биологии. Экзаменационный билет содержит тестовые вопросы в соответствии с основными требованиями Единого государственного экзамена (ЕГЭ). В заданиях части А необходимо указать один правильный ответ. За правильно решенное задание начисляется 2 балла. В заданиях части В ответ необходимо...»

«РЕЦЕНЗІЇ Г.И. АНДРЕЕВ. РЕЦЕНЗИЯ НА КНИГУ: ИГНАТЕНКО Н.Г., МАЛЕЕВ В.А. ЭКОЛОГИЯ И ЭКОНОМИКА ПРИРОДОПОЛЬЗОВАНИЯ: УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ. – ХЕРСОН, ХДАУ, 1998. – 224 с. Речь пойдет об учебном пособии под названием Экология и экономика природопользования, изданном в 1998 г. Херсонским государственным агроуниверситетом по рекомендации методической комиссии экономического факультета (протокол № 6 от 19.06.1998 г.). Авторы: Н.Г. Игнатенко – доктор географических наук, профессор, академик УЭАН, заведующий...»

«Государственная система санитарно-эпидемиологического нормирования Российской Федерации 1.3. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИЙ, ИСПОЛЬЗУЮЩИХ МЕТОДЫ АМПЛИФИКАЦИИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ РАБОТЕ С МАТЕРИАЛОМ, СОДЕРЖАЩИМ МИКРООРГАНИЗМЫ I - IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ Методические указания МУ 1.3.2569-09 Москва -2009 1. Разработаны: Федеральным государственным учреждением науки “Центральный научноисследовательский институт эпидемиологии” Роспотребнадзора (В.И. Покровский, Г.А. Шипулин, И.Н....»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Сыктывкарский лесной институт (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный лесотехнический университет имени С. М. Кирова Кафедра воспроизводства лесных ресурсов АНАТОМИЯ РАСТЕНИЙ Учебно-методический комплекс по дисциплине для студентов направления бакалавриата 250100.62 Лесное дело всех форм обучения Самостоятельное учебное электронное...»

«Министерство общего и профессионального образования Российской федерации Томский политехнический университет УТВЕРЖДАЮ Зав. каф. Промышленной и медицинской электроники проф., д-р техн. наук _ Б. А. Багинский ФОРМАЛЬНЫЕ И НЕФОРМАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ СИГНАЛОВ ЭМПИРИЧЕСКИЕ ФОРМУЛЫ. ДИСПЕРСИОННЫЙ АНАЛИЗ Методические указания к лабораторным работам по дисциплине Методы обработки медико-биологических данных Томск - УДК 628. Формальные и неформальные методы моделирования...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тверской государственный университет УТВЕРЖДАЮ Декан факультета географии и геоэкологии Е.Р. Хохлова 2012 г. Учебно-методический комплекс по дисциплине ГЕОИНФОРМАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ (ГИС), 3 курс 020401.65 География очная форма обучения Специализация Использование ресурсов и охрана природы Обсуждено на заседании кафедры Составитель: туризма и природопользования...»

«БИБЛИОТЕЧКА РУКОВОДИТЕЛЯ ЗАНЯТИЯ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ ПОДГОТОВКА 2 БИБЛИОТЕЧКА РУКОВОДИТЕЛЯ ЗАНЯТИЯ ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ ПОДГОТОВКА СБОРНИК МАТЕРИАЛОВ И НОРМАТИВОВ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЯМ И ТРЕНИРОВКАМ НОВОСИБИРСК УЧЕБНЫЙ ДИВИЗИОН ВОЙСКОВОЙ ЧАСТИ 34148 2003 3 Методическое пособие рассмотрено и утверждено на заседании учебно-методического совета учебного дивизиона войсковой части...»

«Данная книга — современное учебное пособие, в котором изложены естественно-научные, философские и религиозные взгляды на антропологию, медико-биологические науки и медицинскую практику. Рассматривается по­ знание человеком самого себя и своего места в мире в контексте общих про­ блем здоровья и болезни, жизни и смерти, физического и морального добра и зла, методологических проблем диагностики и лечения. Автор, опираясь на многочисленные медицинские, духовные и фило­ софские труды, а также на...»




 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.