WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 15 |

Воздействие фрагментов рибосомных генов, накапливающихся во внеклеточной днк, на свойства мезенхимальных стволовых клеток человека

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

МОСКОВСКИЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

Чвартацкая Оксана Викторовна

Воздействие фрагментов рибосомных генов, накапливающихся во

внеклеточной ДНК, на свойства мезенхимальных стволовых клеток человека Специальность 03.01.04 биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, доцент Севастьянова Г.А.

Москва –

ОГЛАВЛЕНИЕ

Принятые сокращения и аббревиатуры………………………… ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………..

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Биологические свойства и функции внеклеточной ДНК человека……………………………………………………………… Концентрация внеклеточной ДНК в биожидкостях……………….

1.1.1 Размеры фрагментов внеклеточной ДНК………………………….

1.1.2 Модификация оснований внеклеточной ДНК…………………….

1.1.3 Происхождение фрагментов внеклеточной ДНК в организме…..

1.2 Микроокружение внеклеточной ДНК………………………………...

1. Взаимодействие внеклеточной ДНК с 1. клетками…………………………………………………………….... Белки семейства «toll-like» рецепторов (TLR)……………………..

1.4.1 Лиганды для белков TLR9.……………………………………………… 1.4.1.1 TLR9-сигнальный путь и связанные с ним NF-kB-, JNK/p38-, 1. IRF-cигнальные пути.……………………………………..…………. Роль цитокинов в организме………………………...……………....

1.6 Провоспалительные цитокины……………………………………… 1.6. Противовоспалительные цитокины…………………………….…... 1.6. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………………………………… Выделение и культивирование мезенхимальных стволовых 2. клеток.………. ……………………………………………………..… Исследование экспрессии клетками поверхностных 2.1. белков.………………………………………………………………... Определение концентрации повторяющейся последовательности 2. ДНК человека в крови………………………………….…………… Конструирование плазмиды п(рДНК).…………………………...

2.3 Выделение РНК из мезенхимальных стволовых 2. клеток………………………………………………………………... Обработка выделенной РНК ДНКазой ……………………….……. 2.4. Определение концентрации РНК……………………...…………….

2.4. Выделение ДНК из мезенхимальных стволовых 2. клеток…………………………………………………………………. Определение концентрации ДНК……………………………….…..

Постановка полимеразцой цепной реакции………………….…….

2. Проведение реакции обратной транскрипции.…………………….

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени……… Иммуногистохимия………………………………………………… Связывание антител с NF-kB……………………………………….

Связывание антител с TLR9………………………………………...

2.7. Иммуноферментный анализ секреции цитокинов………………… 2. Иммуноферментный анализ секреции цитокина IL-10…………… Иммуноферментный анализ секреции цитокина TNF…………… 2.8. Определение активности каспазы 3……………………..………….. 2. Статистическая обработка результатов…………………………….. 2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ ……………………………… Рецепторы, отвечающие на действие CG-богатой внеклеточной 3. Определение экспрессии мРНК TLR9 в мезенхимальных 3.1. стволовых клетках, при действии на них вкДНК, модельной 3. мезенхимальных стволовых клетках в ответ на действие Кинетика изменения во времени экспрессии мРНК TLR9 и 3.2. адаптера TLR-сигнального пути – MyD88 в ответ на стимуляцию п(рДНК).…………………………………………………………………… Aктивация NF-kB -, JNK/p38-, IRF- сигнальных путей в ответ на 3.2. стимуляцию мезенхимальных стволовых клеток фрагментами п(рДНК).……………………………………………………..……… Транслокация NF-kB в ядро мезенхимальных стволовых клеток 3.2. при действии фрагментов п(рДНК).…………………………….……..

П(рДНК) стимулирует увеличение количества мРНК цитокинов 3.2. IL10 и TNF…………………………………………..……………...

3. мезенхимальных стволовых клетках при действии модельных фрагментов внеклеточной ДНК…………………………………….. Принятые сокращения и аббревиатуры CpG-ОДН – CpG-содержащие олигонуклеотидные аналоги;

GAPDH – глицеральдегид-3- фосфатдегидрогеназа;

IL – интерлейкин;

IRAK – (от англ. interleukin-1 receptor-associated kinase ) – интерлейкин- рецептор - связанная киназа;

IRF3/7 – фактор, регулирующий транскрипционную активность гена интерферона;

JNK (англ. c-Jun N-terminal kinase; c-Jun N-концевые киназы) - стрессактивируемые протеинкиназы MAPК – митоген активируемая протеинкиназа;

MyD88 – (от англ. мyeloid differentiation primary response gene) – ген миелоидной дифференцировки первичного ответа;

NF-kB (ядерный фактор «каппа-би»; англ. nuclear factor kappa-light-chainenhancer of activated B cells, NF-kB) — универсальный фактор транскрипции PAMP – (от англ. pathogen-associated molecular pattern) –патогенсвязывающий молекулярный паттерн;

real-time PCR – полимеразная цепная реакция в реальном времени;

SDS – додецилсульфат натрия;

SSC – стандартный солевой раствор;

TBP – TATA-связывающий белок;

TCR – Т-клеточный рецептор;

TIR – (от англ. toll-interleukin-1 receptor) – толл-интерлейкин-1 рецептор;

TLR – (от англ. toll-like receptor) – семейство толл-подобных рецепторов;

TNF – фактор некроза опухоли;

АПК – антигенпредставляющие клетки;

вкДНК – внеклеточная ДНК;

гДНК – геномная ДНК;

ГКГ – главный комплекс гистосовместимости;

инг-ОДН – ингибирующие олигодезоксинуклеотиды;



ИФА – иммуноферментный анализ;

ИФН – интерферон;

КД – контрольные доноры;

МСК – мезенхимальные стволовые клетки;

НК-клетки – клетки нормальных киллеров;

ОДН – олигодезоксинуклеотиды;

ОНП – однонуклеотидный полиморфизм;

п(рДНК) – фрагменты рибосомной ДНК, встроенные в плазмиду ПЦР – полимеразная цепная реакция;

РАИЛ – рецептор антагонистов интерлейкинов;

СатIII – клонированный фрагмент субфракции сателлита 3;

ТАТА – короткий А-Т-обогащенный участок (типичная последовательность —...ТАТААА...) гена эукариот;

ТКР – Т-клеточный антигенраспознающий рецептор;

ТОрДНК – транскрибируемая область рибосомного повтора человека;

ТФР – трансформирующий фактор роста бета;

ФНО – фактор некроза опухоли ;

ЭДТА – этилендиаминтетрауксусная кислота;

яДНК – ядерная ДНК;

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы Внеклеточная ДНК (вкДНК) в норме присутствует в плазме крови человека и в межклеточном веществе. До сих пор остаются невыясненными вопросы ее происхождения, однако в литературе обсуждаются две главных модели. Первая из них предполагает, что появление вкДНК связано с гибелью клеток в организме, то есть циркулирующая вкДНК в кровотоке – это фрагменты ДНК клеток, подвергшихся апоптозу. В рамках второй модели вкДНК появляется в межклеточном веществе в результате секреции клетками фрагментов ДНК. Показано, что в крови пациентов с различными патологиями концентрации вкДНК существенно возрастают. Поэтому на данный момент наибольший интерес научного сообщества вызывает ее применение в диагностике различных заболеваний.

До недавнего времени предполагалось, что вкДНК не оказывает влияния на клетки организма. Известно, что геномная ДНК млекопитающих не обладает иммуностимулирующим действием, так как содержит незначительное количество неметилированных CpG–мотивов в своем составе, а также включает иммуносупрессорные последовательности. Однако вкДНК существенно отличается от ядерной ДНК (яДНК) по ряду свойств.

Установлено, что вкДНК в отличие от яДНК обогащена повторяющейся последовательностью - транскрибируемой областью рибосомного повтора (ТОрДНК) [Калашникова и соавт., 2006; Костюк и соавт., 2006; Вейко и соавт., 2007], которая аналогично бактериальной ДНК является потенциальным иммуномодулятором, также было показано, что вкДНК и фрагмент ТОрДНК обладает стимулирующим действием на лимфоциты человека [Вейко и соавт., 2006]. Кроме того, отмечено, что активирующее действие ТОрДНК на клетки иммунной системы опосредуется через рецепторы семейства Toll-like, или TLR – (от англ. toll-like receptor) [Вейко и соавт., 2006].

Однако остается не известным, оказывают ли воздействие фрагменты вкДНК на свойства мезенхимальных стволовых клеток.

За последнее время достигнуты большие успехи в изучении биологии стволовых клеток, но остается еще много вопросов, связанных с их взаимодействием с клетками микроокружения, а также ролью различных сигнальных путей в регуляции стволовых клеток. Стволовые клетки неспециализированные клетки, не имеют тканеспецифических маркеров и поддерживают статус недифференцированных клеток. При действии определенных биологических сигналов стволовые клетки способны дифференцироваться в специализированные клетки [Morrison et al., 2006].

Применение эмбриональных стволовых клеток открывает широкие возможности для клинической практики, но вызывает большое количество этических проблем. Поэтому в настоящее время все больше внимания уделяется изучению свойств стволовых клеток из других источников.

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) являются предшественниками клеток мезенхимальной линии, это хрящи, кости, сухожилия, жир, мышцы.

МСК достаточно легко выделяются из костной и жировой тканей, а также из других источников, и быстро растут в лабораторных условиях. Кроме того, мезенхимальные стволовые клетки способны оказывать иммуносупрессорное действие посредством индукции регуляторных Т-лимфоцитов и дендритных клеток [Stagg, 2007]. Эти свойства способствуют применению мезенхимальных стволовых клеток в практической медицине. В то же время не полностью изучена регуляция этих клеток и сигнальные пути, активирующиеся при их взаимодействии с клетками организма, поскольку эти сигнальные пути образуют сложную сеть.

Известно, что стволовые клетки локализованы и функционируют в определенном микроокружении, называемом “нишей” [Morrison et al., 2008].

Нишу образуют клетки микроокружения, продуцирующие факторы роста и другие регуляторные молекулы, и внеклеточный матрикс, представленный базальными мембранами на границе эпителиальных и мезенхимных тканей.

«Ниша» обеспечивает жизнеспособность, самоподдержание и самовоспроизведение стволовых клеток, а также длительное их пребывание в состоянии покоя и дифференциацию дочерних транзиторных клеток, тем самым она защищает стволовые клетки от внешних воздействий [Morrison et al., 2008]. При определенных условиях стволовые клетки могут покидать ниши (процесс мобилизации стволовых клеток), сохраняя жизнеспособность и возвращаться в свои ниши («хоуминг» СК) [Lapidot et al., 2005].

Повреждение ткани стимулирует переход стволовых клеток к пролиферации, поскольку стволовые клетки являются пролиферативным резервом при регенерации ткани [Lehrer et al., 1998]. Свойство стволовых клеток способствовать репарации поврежденных тканей активно используется в практической медицине. В очаг повреждения либо вводятся аутологичные стволовые клетки, либо стимулируются к пролиферации эндогенные стволовые клетки, либо активируется мобилизация стволовых клеток из других источников с помощью ряда цитокинов с их последующей миграцией в зоны повреждения [Daniels, 2007]. Однако процессы, происходящие со стволовыми клетками в очаге повреждения, также остаются малоизученными.

Целью настоящей работы является изучение влияния внеклеточной ДНК и ее фрагментов на мезенхимальные стволовые клетки, посредством моделирования in vitro ситуации, когда эндогенные мезенхимальные стволовые клетки, мигрирующие из ниши в очаги повреждения, или мезенхимальные стволовые клетки, введенные в организм с целью терапии, контактируют с ГЦ-богатой вкДНК, которая в норме и при патологии содержится в плазме крови.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:



Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 15 |
 

Похожие материалы:

« ВЕНЕДИКТОВ Алексей Александрович РАЗРАБОТКА БИОМАТЕРИАЛОВ ДЛЯ РЕКОНСТРУКТИВНОЙ ХИРУРГИИ НА ОСНОВЕ КСЕНОПЕРИКАРДИАЛЬНОЙ ТКАНИ 14.01.24 – Трансплантология и искусственные органы 03.01.04 – Биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор В.И. Севастьянов доктор биологических наук, профессор М.Т. Генгин Москва – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………………………… 4 ОСНОВНАЯ ...»

« Малева Елена Анатольевна МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС ХРОНИЧЕСКОЙ АНАЛЬНОЙ ТРЕЩИНЫ И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА ВЫБОР МЕТОДА ЛЕЧЕНИЯ 14.01.17 – Хирургия 03.02.03 – Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: Грекова Наталия Михайловна кандидат медицинских наук, доцент Телешева Лариса Федоровна доктор медицинских наук, профессор Челябинск, 2014 2 Оглавление: Введение…………………………………………………………………………….5 Глава первая Современные ...»

« СУДАКОВ ДМИТРИЙ ВАЛЕРИЕВИЧ МАТЕМАТИЧЕСКИЕ МОДЕЛИ ВЫБОРА РАЦИОНАЛЬНЫХ СХЕМ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ Специальность: 03.01.09 – Математическая биология, биоинформатика (медицинские науки) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Снопков В.Н. Курск – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА I. АНАЛИЗ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН У БОЛЬНЫХ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 1.1. ...»

« Бухарина Наталья Сергеевна ВИЗУАЛИЗАЦИЯ И МОНИТОРИНГ АКТИВНОСТИ ЦИТОХРОМА P450 BM3 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ Специальность 03.01.04 – биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Ю.Д. Иванов Москва – 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ Введение 6 Глава 1. Обзор литературы 12 Цитохром P450 BM3 1.1 12 Энзимология единичных молекул ферментов 1.2 18 Методы измерения каталитической ...»

« Бирюков Сергей Александрович ПАРАМФИСТОМИДОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ХОЗЯЙСТВАХ СЕВЕРО-ЗАПАДА НЕЧЕРНОЗЕМНОЙ ЗОНЫ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Специальность 03.02.11 – паразитология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук научный руководитель – кандидат ветеринарных наук, профессор П.А. Лемехов Москва – 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ 1. КРАТКАЯ КЛИМАТОГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕВЕРО-ЗАПАДНЫХ ОБЛАСТЕЙ НЕЧЕРНОЗЕМНОЙ ЗОНЫ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 2. ...»

« Славгородская Дарья Алексеевна ВЛИЯНИЕ СЛОЖНОГО ОРГАНОМИНЕРАЛЬНОГО КОМПОСТА НА СВОЙСТВА ЧЕРНОЗЕМА ОБЫКНОВЕННОГО И УРОЖАЙНОСТЬ ОЗИМОЙ ПШЕНИЦЫ В ЗАПАДНОМ ПРЕДКАВКАЗЬЕ Специальность 03.02.13 – почвоведение Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, Белюченко Иван Степанович Краснодар – 2014 СОДЕРЖАНИЕ С. ВВЕДЕНИЕ 4 1 ОТХОДЫ ПРОМЫШЛЕННОГО И СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОГО 8 ПРОИЗВОДСТВ КАК СЫРЬЕВАЯ ...»

« ТУРЫГИН Сергей Павлович ЦИРКАДНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И СПЕЦИАЛЬНОЙ ФИЗИЧЕСКОЙ ПОДГОТОВЛЕННОСТИ БАСКЕТБОЛИСТОВ В ОБЫЧНЫХ УСЛОВИЯХ И ПРИ ШИРОТНЫХ ПЕРЕМЕЩЕНИЯХ 03.00.13 - Физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Ендропов О.В. Новосибирск 2003 ОГЛАВЛЕНИЕ 3 Введение.….……………………………………………….…………….… Обзор литературы…………………………….……………. 9 Глава 1. Современные представления ...»

« Гегерь Эмилия Владимировна ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ТЕХНОГЕННЫХ НАГРУЗОК ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ НА ФОРМИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ И МЕДИЦИНСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Золотникова Галина Петровна Брянск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ Cписок используемых сокращений 5 Общая характеристика работы - 7 Глава 1 ...»

« КОЗЛОВА Александра Дмитриевна РАЗРАБОТКА ПЦР-ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАРВОВИРУСА И ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНОРЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., профессор Обухов И.Л. Москва 2014 год ОГЛАВЛЕНИЕ ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) 1.1 Клинические признаки ...»

« Головатских Инна Васильевна ПОКАЗАТЕЛИ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ НЕКОТОРЫМИ БИОЭЛЕМЕНТАМИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОФИЛАКТИКИ ДЕФИЦИТА КАЛЬЦИЯ И ЙОДА У ДЕТЕЙ ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА ЮЖНОГО РЕГИОНА БАШКИРИИ (НА ПРИМЕРЕ Г.МЕЛЕУЗА И МЕЛЕУЗОВСКОГО РАЙОНА) 03.01.04 - Биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: Аглетдинов Эдуард Феликсович доктор медицинских наук Уфа – 2014 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ 4 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. ...»




 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.