WWW.DIS.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |

Стандартизированное исследование экспрессии генов bcr-abl, prame и wt1 у больных хроническим миелолейкозом

-- [ Страница 1 ] --

-1

На правах рукописи

Аксенова Елена Владиславовна

СТАНДАРТИЗИРОВАННОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ

ГЕНОВ BCR-ABL, PRAME И WT1

У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ

14.01.21 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва, 2011 -2

Работа выполнена в Федеральном Государственном Бюджетном Учреждении Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздравсоцразвития) Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Туркина Анна Григорьевна кандидат биологических наук Мисюрин Андрей Витальевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Румянцев Сергей Александрович доктор биологических наук Хамаганова Екатерина Георгиевна Ведущее научное учреждение:

Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина РАМН (РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН)

Защита состоится 2011г.

на заседании диссертационного совета Д. 208.135.02.при Федеральном Государственном Бюджетном Учреждении Гематологический научный центр Минздравсоцразвития РФ по адресу: Москва, Новый Зыковский проезд, д.4а

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития РФ

Автореферат разослан _2011г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат медицинских наук Зыбунова Е.Е.

-3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования Транслокация (9;22) является специфической генетической аномалией, характерной для хронического миелолейкоза (ХМЛ). В результате этой реципрокной транслокации соединяются 5'-область гена BCR из 22 хромосомы и 3'- область гена ABL из 9 хромосомы, что приводит к образованию химерного онкогена BCR-ABL.

Онкоген BCR-ABL кодирует белок с нерегулируемой тирозинкиназной активностью, функционирование этого белка играет решающую роль в патогенезе заболевания (Melo JV, et al, 2004).

Молекулярный мониторинг экспрессии BCR-ABL методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени является в настоящее время обязательным методом контроля лечения ХМЛ у пациентов на терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) 1 и 2 поколения. Достижение большого молекулярного ответа (БМО) признано показателем оптимальной терапии и важным прогностическим фактором безрецидивной выживаемости больных ХМЛ [Baccarani M, et al, 2009, Palandri F, et al, 2009].

Для адекватной оценки уровня транскрипта BCR-ABL применяемый метод молекулярного мониторинга должен обладать достаточной чувствительностью, воспроизводимостью и специфичностью. Множество существующих вариаций метода молекулярной диагностики не позволяют напрямую сравнивать результаты, получаемые в разных лабораториях, затрудняют совместное участие в научных и клинических исследованиях. Наиболее универсальным инструментом стандартизации методики признана концепция международной шкалы (International Scale, IS), переход на которую осуществляется путем обмена образцами с референсными лабораториями и вычисления фактора конверсии. Международная шкала позволяет представлять результаты мониторинга в единых координатах, создает общее информационное пространство для исследователей [Branford S, et al, 2008]. Однако до настоящего времени в России совершенно отсутствовал опыт подобной работы.

Опираясь на факт об одном основном генетическом происхождении ХМЛ, применяемая в настоящее время терапия ИТК позволяет целенаправленно блокировать функционирование белка BCR-ABL. Однако, несмотря на значительные успехи подобной терапии, у части больных не удается добиться оптимального ответа на лечение. По результатам международного исследования IRIS, только 60% больных, у которых терапия иматинибом была начата в ранней хронической фазе (РХФ), оставались на этой терапии через 7 лет после ее начала (O’Brien S G, et al, 2008). Причинами прекращения терапии явились прогрессия заболевания, неэффективность или непереносимость терапии. Полного цитогенетического ответа (ПЦО) на терапии иматинибом достигли 82% пациентов, 17 % из достигших ответа пациентов впоследствии его потеряли.

-4Клинические различия хронической фазы (ХФ) ХМЛ обусловлены, повидимому, биологической гетерогенностью заболевания. Известно, что при ХМЛ в опухолевой клетке, по сравнению с нормальной, существенно изменяется уровень экспрессии многих генов. Геномная нестабильность, наблюдаемая при ХМЛ, может являться следствием образования гена BCR-ABL, или наоборот, хромосомная транслокация возникает как последствие ранее существующей геномной нестабильности (Cilloni D, Saglio G, 2009).

Гены PRAME и WT1, по данным литературы, занимают одно из ключевых мест среди ряда генов, экспрессия которых значительно изменяется при ХМЛ. Так, при исследовании профиля экспрессии генов методом микроэрреев, PRAME и WT оказались в числе тех 10 генов из 3500 изученных, у которых экспрессия при прогрессии ХМЛ наиболее сильно отличалась от экспрессии в ХФ (Radich JP, et al, 2006).

Экспрессия гена PRAME в норме наблюдается в тканях репродуктивной системы и надпочечников, а гиперэкспрессия обнаружена при многих видах солидных опухолей и при гемобластозах, что позволило отнести белок PRAME к классу канцертестис антигенов (Epping MT, Bernards R, 2006). Экспрессия PRAME хорошо изучена при острых лейкозах, при которых в дебюте заболевания является признаком благоприятного прогноза. Данные о частоте и уровне экспрессии PRAME в разных фазах ХМЛ являются противоречивыми, что не позволяет однозначно определить его роль в прогрессии заболевания. Получены сообщения о негативном влиянии экспрессии PRAME на миелоидную дифференцировку (Oehler VG, et al, 2009).



Экспрессия транскрипционного фактора WT1 ассоциируется со многими злокачественными заболеваниями, в ряде случаев он рассматривается как онкосупрессор, а при гематологических заболеваниях как онкоген (Yang L, et al, 2007). При острых лейкозах повышенный уровень экспрессии WT1 имеет прогностическое значение и ассоциируется с плохим ответом на терапию. По мнению немецких исследователей, уровень экспрессии WT1 в фазе акселерации и бластном кризе ХМЛ может служить индикатором гематологического рецидива (Na IK, et al, 2005).

Однако о значении раннего выявления экспрессии генов WT1 и PRAME у больных ХМЛ на дальнейшее течение этого заболевание ничего не было известно.

Кроме того, ничего не было известно о работе этих генов у больных ХМЛ с мутациями BCR-ABL, приводящими к резистентности к терапии ИТК.

Получение информации о дополнительных молекулярных механизмах в патогенезе ХМЛ и анализ их функционирования при прогрессии заболевания может помочь в разработке критериев прогноза эффективности терапии. Изучение динамики экспрессии гена BCR-ABL и других генов, экспрессия которых изменяется при ХМЛ, сопоставление этих параметров для более детальной характеристики биологии заболевания, послужило основанием для проведения собственных исследований.

Анализ молекулярно-биологических особенностей хронического миелолейкоза на основе изучения закономерностей экспрессии генов BCR-ABL, PRAME, WT1 у больных, получающих терапию ингибиторами тирозинкиназ.

Задачи исследования:

1.Разработать на основе ПЦР в реальном времени диагностические тест-системы для количественной оценки экспрессии генов BCR-ABL, PRAME, WT1, провести стандартизацию метода определения экспрессии гена BCR-ABL.

2. Осуществить валидацию метода молекулярной оценки экспрессии гена BCRABL путем сравнения параметров молекулярного и цитогенетического ответов.

3. Определить, как уровень экспрессии BCR-ABL у больных в хронической фазе ХМЛ, получающих терапию иматинибом и достигших полного цитогенетического ответа, коррелирует с дальнейшим течением заболевания.

4. Изучить закономерности достижения молекулярного ответа у больных ХМЛ, получающих терапию иматинибом, и оценить прогностическое значение экспрессии BCR-ABL на ранних сроках терапии.

5. Определить частоту встречаемости и уровень экспрессии генов PRAME и WT1, оценить взаимосвязь уровня экспрессии этих генов с уровнем экспрессии гена BCRABL и возможное прогностическое значение их экспрессии у больных ХФ ХМЛ в дебюте заболевания и при терапии иматинибом.

6. Сравнить экспрессию генов PRAME и WT1 у больных ХФ ХМЛ с оптимальным ответом на терапию иматинибом и у больных, резистентных к терапии, сопоставить экспрессию этих генов с мутационным статусом гена BCR-ABL у резистентных больных.

Научная новизна:

Впервые показано, что уровень экспрессии генов PRAME и WT1 отражает наблюдаемые у больных ХМЛ различия в ответах на терапию иматинибом, установлена ассоциация между экспрессией гена PRAME и мутационным статусом гена BCR-ABL. Обнаружен высокий уровень экспрессии гена BCR-ABL у ряда больных ХМЛ с полным цитогенетическим ответом, получавших терапию иматинибом. У больных с уровнем экспрессии гена BCR-ABL равным или превышающим 1% IS, зафиксированным при полном цитогенетическом ответе, продемонстрирована значительная вероятность цитогенетического рецидива. На ранних этапах лечения иматинибом установлены пороговые значения экспрессии гена BCR-ABL, характерные для больных ХМЛ с последующей неудачей данного вида терапии. Показано, что при достижении полного цитогенетического ответа методом, наиболее полно отражающим динамику опухолевого клона, является молекулярный мониторинг экспрессии гена BCR-ABL.

Стандартизация метода молекулярного мониторинга экспрессии гена BCR-ABL позволяет представить данные об экспрессии гена BCR-ABL у больных ХМЛ, полученные в лаборатории генной инженерии ФГБУ ГНЦ, в международной шкале в единицах IS. Пересчет данных молекулярного мониторинга, полученных в лаборатории за несколько лет, в формат международной шкалы, дал возможность объединить данные экспрессии BCR-ABL в регистре больных ХМЛ РФ и оценить результаты мониторинга в течение длительного периода терапии. Использование шкалы IS позволяет применять данные молекулярного мониторинга для оценки эффективности терапии больных ХМЛ в соответствии с общепринятыми критериями ответа на терапию, рекомендованными международным консорциумом European Leukemia Net (ELN) и другими межклиническими и межлабораторными исследовательскими группами.

Опыт лаборатории генной инженерии ФГБУ ГНЦ по проведению молекулярного мониторинга успешно применяется в других российских лабораториях, что ведет к существенному повышению качества диагностики и мониторинга ХМЛ в нашей стране. Применение дополнительных молекулярных маркеров расширяет возможности дифференцированной оценки клинических проявлений ХМЛ и дает возможность выявить неблагоприятные варианты течения этого заболевания.

Внедрение результатов в практику: Лаборатория генной инженерии ФГБУ ГНЦ применяет разработанный метод молекулярной оценки экспрессии BCR-ABL для диагностики и мониторинга ХМЛ у пациентов ФГБУ ГНЦ, городской клинической больницы им. С.П. Боткина, МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, и других гематологических отделений и клиник Российской Федерации. Созданные в ходе исследования тест-системы используются в ряде диагностических лабораторий Российской Федерации: ОДКБ №1 г. Екатеринбург, КНИИГ и ПК г. Киров, РостГМУ г. Ростов-на-Дону, ОДКБ г. Архангельск.

Основные положения, выносимые на защиту:



Pages:     || 2 | 3 | 4 | 5 |
 

Похожие материалы:

«Лазарева Ольга Вениаминовна ИНФОРМАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ МОНИТОРИНГА И АНАЛИЗА ОТДАЛЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ 14.01.21 - Гематология и переливание крови АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Научный руководитель: доктор медицинских наук, ...»

«ЮХИМЕНКО Жанна Владимировна КОНСТИТУЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ВЕРХНИХ ОТДЕЛОВ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА И ИХ ПРОФИЛАКТИКА У ДЕТЕЙ 5–9 ЛЕТ 14.01.08 – Педиатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Иваново 2010 Работа выполнена на кафедре поликлинической педиатрии с курсом здорового ребенка и общего ухода за детьми Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ивановская государственная медицинская ...»

«Яцык Галина Александровна Современная лучевая диагностика инвазивного аспергиллеза легких у больных гемобластозами и депрессиями кроветворения 14.01.21 – Гематология и переливание крови 14.01.13- Лучевая диагностика и лучевая терапия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва -2010 г. 1 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр РАМН Научные руководители: доктор медицинских наук Готман Лев ...»

«Липатова Ирина Степановна АЛЛОИММУНИЗАЦИЯ ГРУППОВЫМИ АНТИГЕНАМИ ЭРИТРОЦИТОВ (ИНДИВИДУАЛЬНЫЕ И ПОПУЛЯЦИОННЫЕ ОСОБЕННОСТИ) 14. 00. 29 – гематология и переливание крови АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2009 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр РАМН, г. Москва, филиале Дзержинская станция переливания крови Государственного учреждения здравоохранения Нижегородская областная станция ...»

«Хамидова Джамиля Магомедрасуловна ЭОЗИНОФИЛЬНЫЙ КАТИОННЫЙ ПРОТЕИН КАК ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ МАРКЕР ХРОНИЧЕСКОГО РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО ПОЛИПОЗНОГО РИНОСИНУСИТА И АЛЛЕРГИЧЕСКОГО РИНИТА 14.01.03 – болезни уха, горла и носа 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва–2012 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Научно-клинический центр оториноларингологии ФМБА России Научные руководители: ...»

«Гапонова Надежда Ильинична Совершенствование системы оказания скорой медицинской помощи больным с гипертоническими кризами на догоспитальном этапе 14.01.05 – Кардиология (мед. науки) 14.02.03 – Общественное здоровье и здравоохранение (мед. науки) Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московский государственный медико-стоматологический ...»

«Шавырин Дмитрий Александрович ДИАГНОСТИКА И ХИРУРГИЧЕСКОЕ ЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ И ОПУХОЛЕПОДОБНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОСТЕЙ, ОБРАЗУЮЩИХ КОЛЕННЫЙ СУСТАВ, У ВЗРОСЛЫХ 14.01.15 – травматология и ортопедия Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в ФГБУ Центральный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова Минздрава России. Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Балберкин Александр Викторович ...»

«Масленников Антон Васильевич ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ И РОДОВ У ЖЕНЩИН С НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ ДИСПЛАЗИЕЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ 14.01.01. – акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Уфа – 2014 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: ...»

«ЗАКИРОВ АЙДАР КАМИЛЕВИЧ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ХИРУРГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ ФОРМИРОВАНИЯ ПОЛА У ДЕВОЧЕК 14.01.19 – детская хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук УФА – 2014 2 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Казанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Акрамов ...»

«Дегтярева Дарья Витальевна Объективные неинвазивные методы исследования голосовой функции у детей 14.01.03 –– болезни уха, горла, носа Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва–2014 2 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Радциг Елена Юрьевна Официальные оппоненты: доктор ...»




 
© 2013 www.dis.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.